Положительный контроль позитивный отрицательный контроль негативный что это значит
Разница между положительным и отрицательным контролем
Содержание:
Ключевые области покрыты
1. Что такое положительный контроль
— Определение, Процесс, Использование
2. Что такое отрицательный контроль
— Определение, Процесс
3. В чем разница между положительным и отрицательным контролем
— Сравнение основных различий
Ключевые термины: анализ, контроль, эксперимент, отрицательный контроль, положительный контроль
Что такое положительный контроль
Положительный контроль не подвергался экспериментальному тесту; это делается параллельно с этим. Положительный контроль используется для получения ожидаемого результата. Этот положительный результат обеспечивает успех теста. После получения положительного результата тест можно использовать для экспериментального лечения. Если положительный контроль не дает ожидаемого результата, его следует делать снова и снова (изменяя различные параметры) до получения положительного результата.
Есть много применений положительного контроля в биохимических экспериментах.
Что такое отрицательный контроль
Отрицательный контроль используется для подтверждения отсутствия реакции на реагент или микроорганизм (или любой другой параметр), использованный в тесте. Чтобы получить хороший результат от отрицательного контроля, следует убедиться, что нет чистого ответа на тест. Следовательно, отрицательный контроль полезен при выявлении внешних воздействий на эксперимент. Например, влияние загрязнителей на эксперимент может быть указано.
Разница между положительным и отрицательным контролем
Определение
Результат
Положительный контроль: Положительный контроль дает положительный результат
Отрицательный контроль: Отрицательный контроль дает отрицательный результат.
отклик
Положительный контроль: Положительный контроль дает ответ на эксперимент.
Отрицательный контроль: Отрицательный контроль не дает никакого ответа.
результат
Положительный контроль: Положительный контроль обеспечивает успех теста.
Отрицательный контроль: Отрицательный контроль используется, чтобы гарантировать отсутствие ответа на тест.
Пользы
Положительный контроль: Положительный контроль используется для проверки достоверности эксперимента.
Отрицательный контроль: Отрицательный контроль используется для выявления влияния внешних факторов на тест.
Заключение
Ссылка:
1. «Научный контроль». Бюллетень Тити Тудоранца,
Тема № 3. Оценка результатов иммуногистохимической реакции. Положительные и негативные контроли.
Возможные проблемы при проведении реакции
При использовании различных методов визуализации антигенов должно получиться интенсивное четко выявляемое окрашивание тканевых антигенов в исследуемом образце и позитивном контроле.
Негативную реакцию сложно интерпретировать, в отличие от позитивной, для этого необходимо провести контрольные исследования с различными дополнительными антителами. Так, при выявлении гистогенеза недифференцированной злокачественной опухоли на предмет рак это или лимфома, отрицательной реакции с антителами на кератин (промежуточный филамент, выявляемый в большинстве раков) недостаточно для постановки диагноза лимфомы. Необходимо провести дополнительное исследование и получить положительное окрашивание опухолевых клеток на общий лимфоцитарный антиген (белок, характерный для большинства лимфом).
Контроль иммуногистохимической реакции
При любом иммуногистохимическом исследовании необходимо использовать различные контрольные тесты для оценки адекватности методической процедуры. Для подобных процедур исследуют стекла с тканью положительного и негативного контроля для того, чтобы убедиться в том, что 1) система визуализации работает адекватно, 2) положительное или негативное окрашивание является специфичным, 3) полностью соблюдена методическая последовательность.
Контроль ИГХ реакции означает оценку специфичности взаимодействия антител с тканевыми антигенами. С этой целью используют отрицательный и положительный контроль.
• Для отрицательного контроля берут срезы тканей, в которых заведомо нет искомого антигена.
• При проведении ИГХ реакции исключают инкубацию с первичными антителами, заменяя их неиммунной сывороткой. Результаты реакции должны быть отрицательными.
• Антитела (в максимальном разведении) предварительно адсорбируют специфическим антигеном (0,1-10 нмоль/ мл), затем их наносят на срезы в качестве контроля. Результаты реакции должны быть отрицательными. После адсорбции специфическим антигеном антитела должны терять способность окрашивать ткань. Подобный контроль необходимо ставить с каждой новой антисывороткой и при обнаружении новых участков взаимодействия антител с тканью.
служат срезы тканей, в которых исследуемый антиген заведомо присутствует. Результаты реакции должны быть положительными.
Возможные проблемы, возникающие при проведении ИГХ реакции
Если наблюдается сильное фоновое окрашивание, то необходимо:
• до нанесения первичных антител провести блокирование нормальной сывороткой животного, донора вторичных антител, либо использовать готовые антитела для блокирования мест неспецифического связывания антител, значительно снижающие фоновую неспецифическую окраску срезов;
• использовать более высокие разведения первичных и/или вторичных антител. В результате разведения абсолютное количество загрязненных антител падает, в то время как количество специфических антител остается достаточным для визуализации антигенов;
• возможно, во время инкубации с сыворотками срезы подсохли;
• уменьшить время инкубирования первичных антител;
• снизить температуру при инкубации первичных антител;
• уменьшить время инкубации субстрата;
• более тщательно промывать срезы после инкубации с антителами;
• провести адсорбцию первичных и вторичных антител альбумином.
• внести в буфер, используемый для промывки, детергент (0,2% тритон Х-100) для снижения неспецифического связывания белка;
• попытаться дополнительно заблокировать эндогенную пероксидазу например 3% или 6% раствором перекиси водорода, нитроферрицианидом натрия или смесью периодат-борогидрид;
• ткани обладают эндогенной биотиновой активностью. Необходимо провести блокирование эндогенной биотиновой активности, используя авидин- биотин блокирующие реагенты до нанесения первичных антител;
• антитела и исследуемая ткань принадлежат к одному виду животных. Мышиные антитела используются для выявления антигенов в тканях мыши;
• удалить комплемент из препарата первичных антител, прогревая антисыворотку 30 мин при 56°С.
Возможные причины слабого окрашивания всех срезов:
• неадекватная фиксация ткани. Необходимо сделать криостатные срезы замороженной нефиксированной ткани, фиксировать их в различных фиксаторах, затем проводить ИГХ реакцию;
• ошибки при осуществлении демаскирования антигенов;
• антиген был разрушен до инкубации с первичной сывороткой. Следует провести блокирование эндогенной пероксидазной активности после проведения реакции с первичными антителами;
• низкая концентрация первичных или вторичных антител. Для подбора оптимальной концентрации антител необходимо провести пробную ИГХ реакцию с их различными разведениями;
• ошибки или пропуск одной из процедур иммунохимического окрашивания. Возможно использование вторичных антител, которые специфически не взаимодействуют с первичными.
• слишком короткое время инкубации с первичными антителами;
• слишком низкая температура при инкубации с первичными антителами;
• слишком интенсивное смывание реагентов буфером привело к разведению реагентов;
• несовместимость реагентов докрашивания или заключения срезов с продуктами реакции;
• неполная депарафинизация срезов. Необходимо продлить время депарафинизации срезов, либо заменить ксилол;
Причины окрашивания только срезов с положительным контролем, в то
время как исследуемая ткань не окрасилась, могут быть следующие:
• в исследуемой ткани нет искомого антигена или его концентрация незначительна. Необходимо увеличить время инкубации первичных антител;
• неадекватная обработка исследуемой ткани, вызвавшая денатурацию исследуемых антигенов;
• образцы слишком долго фиксировались в формалине. В результате произошло маскирование антигена за счет кросс-связывания альдегидов и увеличения гидрофобности ткани. Возможно, для демаскирования антигена необходимо провести дополнительное нагревание срезов в микроволновой печи или обработку ферментом;
• иммунореактивность уменьшилась или повредилась во время обработки тканей при высокой температуре. Не следует нагревать образцы выше 60°С.
Срезы слетают с предметных стекол:
• исключить детергенты из буфера для промывания срезов;
• прогреть парафиновые срезы в термостате в течение 2 суток при температуре 37°С;
• нарушена морфология исследуемой ткани;
• плохая фиксация ткани;
• ткань повреждена из-за высокой концентрации или длительной обработкой детергентами (Triton X-100).
СОДЕРЖАНИЕ
Контролируемые эксперименты
Самыми простыми типами контроля являются отрицательный и положительный контроль, и оба они используются во многих различных типах экспериментов. Этих двух контролей, когда оба они успешны, обычно достаточно для исключения большинства потенциально мешающих переменных: это означает, что эксперимент дает отрицательный результат, когда ожидается отрицательный результат, и положительный результат, когда ожидается положительный результат.
Отрицательный
Положительный
Точно так же в ферментном анализе для измерения количества фермента в наборе экстрактов положительным контролем будет анализ, содержащий известное количество очищенного фермента (в то время как отрицательный контроль не будет содержать фермента). Положительный контроль должен давать большую активность фермента, тогда как отрицательный контроль должен давать очень низкую активность или ее отсутствие.
Если положительный контроль не дает ожидаемого результата, возможно, что-то не так с экспериментальной процедурой, и эксперимент повторяют. Для сложных или сложных экспериментов результат положительного контроля также может помочь по сравнению с результатами предыдущих экспериментов. Например, если было установлено, что хорошо зарекомендовавший себя тест на заболевание имеет тот же эффект, что и предыдущие экспериментаторы, это означает, что эксперимент проводится так же, как и предыдущие экспериментаторы.
Рандомизация
Например, в экспериментах, где затрагивается урожай сельскохозяйственных культур (например, плодородие почвы ), экспериментом можно управлять, назначая обработки для случайно выбранных участков земли. Это снижает влияние изменений в составе почвы на урожайность.
Слепые эксперименты
В ходе эксперимента участник становится невидимым, если он выводит или иным образом получает информацию, которая была для него замаскирована. Ослепление, которое происходит до завершения исследования, является источником экспериментальной ошибки, так как систематическая ошибка, которая была устранена путем ослепления, снова вносится. Раскрытие информации является обычным явлением в слепых экспериментах, и его необходимо измерять и сообщать. Мета-исследование выявило высокий уровень неслепоты в фармакологических испытаниях. В частности, исследования антидепрессантов плохо закрываются. Руководства по отчетности рекомендуют, чтобы все исследования оценивали и сообщали об отсутствии слепоты. На практике очень мало исследований оценивают раскрытие ослепления.
Голикова рассказала о выдаче сертификатов людям с антителами к COVID-19
Вице-премьер РФ Татьяна Голикова 13 декабря рассказала, что сертификаты о перенесенном COVID-19 будут выдавать по уровню антител.
Гражданам, по которым в базах данных есть информация о наличии положительного ПЦР-теста с 1 января 2021 года и имеющим антитела к коронавирусу, будут выдаваться сертификаты о перенесенном заболевании на год, без ПЦР, но с антителами, — на полгода.
«Для граждан, которые имеют положительные тесты после 1 января 2021 года и по которым в медицинских организациях не был поставлен диагноз, будет предложено пройти в соответствующих медицинских лабораториях анализы на наличие антител», — сказала Голикова.
При этом она уточнила, что количество антител измерять не будут. Главное — получить результат: есть или нет.
«Соотносить эти данные по этому человеку с теми данными, которые находятся в базе положительных ПЦР-тестов и при совпадении положительного ПЦР-теста и данных о наличии антител, полученных сейчас, гражданину будет выдаваться соответствующий документ о том, что он переболел, и срок действия этого документа будет устанавливаться на год», — добавила вице-премьер.
Также стало известно, что россияне, получившие медицинский отвод от вакцинации от коронавируса, по законопроекту о введении QR-кодов будут допускаться в общественные места при наличии отрицательного ПЦР-теста.
«Для граждан, которые имеют медотвод или будут иметь медотвод, предполагается получение ПЦР-теста. Его сертификат будет активен в том случае, если при предъявлении при посещении какого-то мероприятия одновременно в нем будут данные об отрицательном ПЦР-тесте», — сказала Голикова.
По ее словам, в настоящее время прорабатывается перечень противопоказаний к вакцинации, который будет представлен в декабре и разослан в регионы.
26 ноября глава Минздрава РФ Михаил Мурашко заявил, что справку о вакцинации, перенесенной болезни или противопоказаниях граждане могут получить по запросу в больнице или в МФЦ.
В России проходит масштабная кампания по вакцинации. Граждан прививают бесплатно. В стране зарегистрировано пять вакцин от коронавируса: «Спутник V», ставший первой в РФ и мире вакциной от COVID-19, а также «Спутник Лайт», «ЭпиВакКорона», «ЭпиВакКорона-Н» и «КовиВак».
Вся актуальная информация по ситуации с коронавирусом доступна на сайтах стопкоронавирус.рф и доступвсем.рф, а также по хештегу #МыВместе. Телефон горячей линии по вопросам коронавируса: 8 (800) 2000-112.
Положительный контроль позитивный отрицательный контроль негативный что это значит
Экспертное заключение – доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии лечебного факультета РГМУ М.В. Самойлов
Учебное пособие выполнено в рамках инновационной образовательной программы Российского университета дружбы народов, направление «Комплекс экспортоориентированных инновационных образовательных программ по приоритетным направлениям науки и технологий»
ПРИКЛАДНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГИСТОХИМИИ Тема № 4. Значение клеточных белков в оценке гистогенеза опухолей Тема № 5. Рецепторные белки в неизмененных и опухолевых клетках Тема № 6. Белки – маркеры клеточного цикла Тема № 7. Факторы апоптоза и пролиферации
При использовании различных методов визуализации антигенов должно получиться интенсивное четко выявляемое окрашивание тканевых антигенов в исследуемом образце и позитивном контроле. Окрашивание негативного контроля также необходимо принимать во внимание при оценке специфичного расположения исследуемых антигенов. Интерпретация полученных результатов ИГХ реакции включает такие термины, как «выраженная позитивная реакция», «ложно-позитивная реакция», «негативная реакция», «ложно-негативное окрашивание».
Негативную реакцию сложно интерпретировать, в отличие от позитивной, для этого необходимо провести контрольные исследования с различными дополнительными антителами. Так, при выявлении гистогенеза недифференцированной злокачественной опухоли на предмет рак это или лимфома, отрицательной реакции с антителами на кератин (промежуточный филамент, выявляемый в большинстве раков) недостаточно для постановки диагноза лимфомы. Необходимо провести дополнительное исследование и получить положительное окрашивание опухолевых клеток на общий лимфоцитарный антиген (белок, характерный для большинства лимфом).
Контроль иммуногистохимической реакции
При любом иммуногистохимическом исследовании необходимо использовать различные контрольные тесты для оценки адекватности методической процедуры. Для подобных процедур исследуют стекла с тканью положительного и негативного контроля для того, чтобы убедиться в том, что 1) система визуализации работает адекватно, 2) положительное или негативное окрашивание является специфичным, 3) полностью соблюдена методическая последовательность.
Контроль ИГХ реакции означает оценку специфичности взаимодействия антител с тканевыми антигенами. С этой целью используют отрицательный и положительный контроль.
В любом опыте важно иметь положительный контроль – окрашивать ткань, заведомо содержащую исследуемые антигены, для того чтобы убедиться, что все антитела работают нормально. В качестве положительного контроля служат срезы тканей, в которых исследуемый антиген заведомо присутствует. Результаты реакции должны быть положительными.
Возможные проблемы, возникающие при проведении ИГХ реакции