Поликлональные антитела что это
Поликлональные антитела
Поликлональные антитела — антитела, образующиеся в сыворотке крови в разных клонах B-лимфоцитов и связываются с различными антигенными детерминантами (эпитопами) молекулы-мишени (антигена).
Смесь антител, выделенную из сыворотки крови, называют поликлональным препаратом. Поликлональные антитела ранее широко использовались в иммунодиагностике, для их получения использовались иммунизированные животные (обычно кролики). Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики:
На смену поликлональным были разработаны препараты антител, специфичные к одной определённой антигенной детерминанте, то есть препараты моноклональных антител. Однако поликлональные антитела сохраняют некоторое использование в иммунодиагностике и лабораторных исследованиях — прежде всего из-за низкой стоимости их получения.
Полезное
Смотреть что такое «Поликлональные антитела» в других словарях:
поликлональные антитела — Антитела, продуцируемые разными клонами B лимфоцитов, способные связывать различные виды эпитопов одного вида антигена [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN polyclonal antibody … Справочник технического переводчика
Антитела — Эта статья об иммунологии. Об украинской поп рок группе см. Антитела (группа); о фильме см. Антитела (фильм, 2005). Антитела (иммуноглобулины, ИГ, Ig) это особый класс гликопротеинов, присутствующих на… … Википедия
Иммуноглобулин — Антитела (иммуноглобулины, ИГ, Ig) это белки, относящиеся к подклассу гамма глобулинов, находящиеся в крови, слюне, молоке и других биологических жидкостях позвоночных животных. Иммуноглобулины синтезируются В лимфоцитами в ответ на чужеродные… … Википедия
Иммуноглобулины — Антитела (иммуноглобулины, ИГ, Ig) это белки, относящиеся к подклассу гамма глобулинов, находящиеся в крови, слюне, молоке и других биологических жидкостях позвоночных животных. Иммуноглобулины синтезируются В лимфоцитами в ответ на чужеродные… … Википедия
Болезнь легионеров — Легионеллёз (болезнь легионеров, питтсбургская пневмония, понтиакская лихорадка, легионелла инфекция) острая инфекционная болезнь, обусловленная различными видами микроорганизмов, относящихся к роду Legionella. Содержание 1 История 2 Этиология 3 … Википедия
Легионеллёзная пневмония — Легионеллёз (болезнь легионеров, питтсбургская пневмония, понтиакская лихорадка, легионелла инфекция) острая инфекционная болезнь, обусловленная различными видами микроорганизмов, относящихся к роду Legionella. Содержание 1 История 2 Этиология 3 … Википедия
Аутоантитела — (аутоагрессивные антитела, аутологичные антитела) антитела, способные взаимодействовать аутоантигенами, то есть с антигенами собственного организма. Могут образовываться спонтанно или вследствие перенесенных инфекций (например, вызванных… … Википедия
Fc — У этого термина существуют и другие значения, см. FC. Фермент папаин разрезает мономеры иммуноглобулинов на два Fab и один Fc Кристаллизующийся фрагмен … Википедия
Fab — При разрезании иммуноглобулина ферментом папаином образуется три фрагмента два Fab и один Fc Участок связывания антигена (Fab, fragment antigen binding) это участок мо … Википедия
Антигенпредставляющие клетки — Взаимодействие Т клеток с презентированным антигеном стимулирует их превращение в CD8+ цитотоксические Т клетки или CD4+ Т хелперы См. также … Википедия
СОДЕРЖАНИЕ
Производство
Общая процедура получения поликлональных антител следующая:
Конъюгат антиген / адъювант вводят выбранному животному для инициирования усиленного иммунного ответа. Ожидается, что после серии инъекций в течение определенного периода времени у животного вырабатываются антитела против конъюгата. Затем у животного отбирают кровь и очищают для получения интересующего антитела.
Напротив, моноклональные антитела происходят из одной клеточной линии.
Существует множество методик получения поликлональных антител у лабораторных животных. Институциональные руководящие принципы, регулирующие использование животных, и процедуры, относящиеся к этим методикам, как правило, ориентированы на гуманные соображения и надлежащее поведение при использовании адъювантов (агентов, которые изменяют действие других агентов, при этом оказывая небольшое, если вообще какое-либо прямое воздействие, при их применении). Это включает выбор адъюванта, пути и места введения, объемы инъекций на место и количество мест на животное. Институциональная политика обычно включает допустимые объемы крови на один забор и меры предосторожности, включая соответствующее ограничение и седативный эффект или анестезию животных для предотвращения травм животных или персонала.
Многие адъюванты также содержат или действуют непосредственно как:
Такие антигены сами по себе обычно являются плохими иммуногенами. Большинство сложных белковых антигенов индуцируют множественные клоны B-клеток во время иммунного ответа, таким образом, ответ является поликлональным. Иммунные ответы на небелковые антигены обычно слабо или усилены адъювантами, и системная память отсутствует.
В настоящее время антитела также производятся путем выделения В-лимфоцитов человека для получения смесей специфических рекомбинантных моноклональных антител. Биотехнологическая компания Symphogen разрабатывает этот тип антител для терапевтических целей. Это первая исследовательская компания, которая завершила вторую фазу испытаний смесей моноклональных антител, имитирующих разнообразие препаратов поликлональных антител. Это производство предотвращает передачу вирусов и прионов, и это простой процесс.
Отбор животных
Когда требуется большое количество антисыворотки, обычно используют коз или лошадей. Многие исследователи отдают предпочтение цыплятам из-за их филогенетической удаленности от млекопитающих. Куры переносят большое количество IgY (IgG) в яичный желток, а сбор антител из яиц устраняет необходимость в инвазивной процедуре кровотечения. Яйца за одну неделю могут содержать в 10 раз больше антител, чем объем крови кролика, полученный за одно еженедельное кровотечение. Однако есть некоторые недостатки при использовании определенных антител куриного происхождения в иммуноанализах. Куриный IgY не фиксирует компонент С1 комплемента млекопитающих и не действует как преципитирующее антитело при использовании стандартных растворов.
Хотя мышей чаще всего используют для производства моноклональных антител, их небольшой размер обычно не позволяет использовать их для получения достаточных количеств поликлональных сывороточных антител. Однако поликлональные антитела мышей можно собирать из асцитной жидкости с использованием любого из ряда методологий получения асцита.
При использовании кроликов молодых взрослых животных (2,5–3,0 кг или 5,5–6,5 фунтов) следует использовать для первичной иммунизации из-за сильного ответа антител. Пик иммунной функции наступает в период полового созревания, и первичная реакция на новые антигены с возрастом снижается. Самки кроликов обычно предпочтительнее, потому что они более послушны и, как сообщается, обладают более сильным иммунным ответом, чем самцы. При использовании беспородных животных следует использовать не менее двух животных на один антиген. Этот принцип снижает вероятность полного отказа в результате отсутствия реакции на антигены отдельных животных.
Препарат антигена
Размер, степень агрегации и относительная природная активность белковых антигенов могут существенно повлиять на качество и количество продуцируемых антител. Небольшие полипептиды ( Количество антигена
Выбор количества антигена для иммунизации зависит от свойств выбранного антигена и адъюванта. Как правило, количество белка в адъюванте от микрограмма до миллиграмма необходимо для выработки антител с высоким титром. Дозировка антигена обычно зависит от вида, а не от массы тела. Так называемое «окно» иммуногенности у каждого вида велико, но слишком много или слишком мало антигена может вызвать толерантность, подавление или иммунное отклонение в отношении клеточного иммунитета, а не удовлетворительный гуморальный ответ. Сообщалось об оптимальных и обычных уровнях белкового антигена для иммунизации определенных видов в следующих диапазонах:
Сообщается, что оптимальные «затравочные» дозы находятся на нижнем конце каждого диапазона.
Аффинность сывороточных антител увеличивается со временем (в месяцах) после инъекции смесей антиген-адъювант и по мере того, как антиген в системе уменьшается. Широко используемые дозы антигена для «бустерной» или вторичной иммунизации обычно составляют половину от начальной дозы. Антигены не должны содержать побочных продуктов и химикатов, таких как полиакриламидный гель, SDS, мочевина, эндотоксин, твердые частицы и экстремальные значения pH.
Пептидные антитела
При исследовании пептидов для синтеза и иммунизации рекомендуется избегать определенных остатков и последовательностей из-за потенциальных проблем с синтезом. Сюда входят некоторые из наиболее общих характеристик:
Реактивность
Исследователи также должны учитывать статус нативности белковых антигенов при их использовании в качестве иммуногенов и реакцию с продуцируемыми антителами. Антитела к нативным белкам лучше всего реагируют с нативными белками, а антитела к денатурированным белкам лучше всего реагируют с денатурированными белками. Если выявляемые антитела должны использоваться на мембранных блотах (белки, подвергнутые денатурирующим условиям), тогда антитела должны быть получены против денатурированных белков. С другой стороны, если антитела должны использоваться для реакции с нативным белком или блокирования активного сайта белка, тогда антитела должны быть созданы против нативного белка. Адъюванты часто могут изменять нативность белка. Обычно абсорбированные белковые антигены в предварительно полученном адъюванте эмульсии масло-в-воде сохраняют лучшую структуру природного белка, чем в эмульсиях вода-в-масле.
Асептичность
Антигены всегда следует готовить с использованием методов, гарантирующих отсутствие в них микробного загрязнения. Большинство препаратов белковых антигенов можно стерилизовать путем пропускания через фильтр 0,22 мкм. Септические абсцессы часто возникают в местах прививки животных при использовании зараженных препаратов. Это может привести к неудаче иммунизации против целевого антигена.
Адъюванты
Наиболее часто используемыми адъювантами для выработки антител являются адъюванты Фрейнда, квасцы, система адъювантов Ribi и Titermax.
Адъюванты Фрейнда
Адъювантная система Ribi
Адъюванты Ribi представляют собой эмульсии типа «масло в воде», в которых антигены смешиваются с небольшими объемами метаболизируемого масла (сквалена), которые затем эмульгируются физиологическим раствором, содержащим поверхностно-активное вещество Полисорбат 80. Эта система также содержит очищенные микобактериальные продукты (фактор пуповины, скелет клеточной стенки) в качестве иммуностимуляторов и бактериального монофосфориллипида А. Доступны три различных вида ориентированных составов адъювантной системы. Эти адъюванты взаимодействуют с мембранами иммунных клеток, что приводит к индукции цитокинов, которые усиливают захват, процессинг и презентацию антигена. Эта адъювантная система намного менее токсична и менее эффективна, чем FCA, но обычно индуцирует удовлетворительное количество антител с высокой авидностью против белковых антигенов.
Титермакс
Титермакс представляет собой адъюванты нового поколения, которые менее токсичны и не содержат материалов биологического происхождения. Он основан на смесях действующих поверхностно-активных веществ, линейных, блоков или цепочек неионных сополимеров полиоксипропилена (ПОП) и полиоксиэтилена (ПОЭ). Эти сополимеры менее токсичны, чем многие другие поверхностно-активные вещества, и обладают мощными адъювантными свойствами, которые способствуют хемотаксису, активации комплемента и продукции антител. Адъювант Titermax образует эмульсию воды в масле из микрочастиц с сополимером и метаболизируемым скваленовым маслом. Сополимер покрыт стабилизирующими эмульсию частицами диоксида кремния, что позволяет включать большие количества самых разнообразных антигенных материалов. Активный адъювант сополимер образует гидрофильные поверхности, которые активируют комплемент, иммунные клетки и повышенную экспрессию основных молекул гистосовместимости класса II на макрофагах. Titermax представляет антиген в высококонцентрированной форме для иммунной системы, что часто приводит к титрам антител, сравнимым с FCA или выше.
Фармацевтическое использование
Преимущества
Использование поликлональных антител (PAb) по сравнению с моноклональными антителами имеет свои преимущества. Технические навыки, необходимые для производства поликлональных антител, не столь высоки. Они недороги в изготовлении и могут быть произведены довольно быстро, на изготовление уходит до нескольких месяцев. PAb гетерогенны, что позволяет им связываться с широким спектром антигенных эпитопов. Поскольку PAb производятся из большого количества клонов B-клеток, они с большей вероятностью будут успешно связываться со специфическим антигеном. PAbs остаются стабильными в различных средах, таких как изменение pH или концентрации соли, что позволяет им более применимо в определенных процедурах. Кроме того, в зависимости от необходимого количества PAbs можно производить в больших количествах по отношению к размеру используемого животного.
СОДЕРЖАНИЕ
Производство
Общая процедура получения поликлональных антител следующая:
Конъюгат антиген / адъювант вводят выбранному животному для инициирования усиленного иммунного ответа. Ожидается, что после серии инъекций в течение определенного периода времени у животного вырабатываются антитела против конъюгата. Затем у животного отбирают кровь и очищают для получения интересующего антитела.
Напротив, моноклональные антитела происходят из одной клеточной линии.
Существует множество методик получения поликлональных антител у лабораторных животных. Институциональные руководящие принципы, регулирующие использование животных, и процедуры, относящиеся к этим методикам, как правило, ориентированы на гуманные соображения и надлежащее поведение при использовании адъювантов (агентов, которые изменяют действие других агентов, при этом оказывая небольшое, если вообще какое-либо прямое воздействие, при их применении). Это включает выбор адъюванта, пути и места введения, объемы инъекций на место и количество мест на животное. Институциональная политика обычно включает допустимые объемы крови на один забор и меры предосторожности, включая соответствующее ограничение и седативный эффект или анестезию животных для предотвращения травм животных или персонала.
Многие адъюванты также содержат или действуют непосредственно как:
Такие антигены сами по себе обычно являются плохими иммуногенами. Большинство сложных белковых антигенов индуцируют множественные клоны B-клеток во время иммунного ответа, таким образом, ответ является поликлональным. Иммунные ответы на небелковые антигены обычно слабо или усилены адъювантами, и системная память отсутствует.
В настоящее время антитела также производятся путем выделения В-лимфоцитов человека для получения смесей специфических рекомбинантных моноклональных антител. Биотехнологическая компания Symphogen разрабатывает этот тип антител для терапевтических целей. Это первая исследовательская компания, которая завершила вторую фазу испытаний смесей моноклональных антител, имитирующих разнообразие препаратов поликлональных антител. Это производство предотвращает передачу вирусов и прионов, и это простой процесс.
Отбор животных
Когда требуется большое количество антисыворотки, обычно используют коз или лошадей. Многие исследователи отдают предпочтение цыплятам из-за их филогенетической удаленности от млекопитающих. Куры переносят большое количество IgY (IgG) в яичный желток, а сбор антител из яиц устраняет необходимость в инвазивной процедуре кровотечения. Яйца за одну неделю могут содержать в 10 раз больше антител, чем объем крови кролика, полученный за одно еженедельное кровотечение. Однако есть некоторые недостатки при использовании определенных антител куриного происхождения в иммуноанализах. Куриный IgY не фиксирует компонент С1 комплемента млекопитающих и не действует как преципитирующее антитело при использовании стандартных растворов.
Хотя мышей чаще всего используют для производства моноклональных антител, их небольшой размер обычно не позволяет использовать их для получения достаточных количеств поликлональных сывороточных антител. Однако поликлональные антитела мышей можно собирать из асцитной жидкости с использованием любого из ряда методологий получения асцита.
При использовании кроликов молодых взрослых животных (2,5–3,0 кг или 5,5–6,5 фунтов) следует использовать для первичной иммунизации из-за сильного ответа антител. Пик иммунной функции наступает в период полового созревания, и первичная реакция на новые антигены с возрастом снижается. Самки кроликов обычно предпочтительнее, потому что они более послушны и, как сообщается, обладают более сильным иммунным ответом, чем самцы. При использовании беспородных животных следует использовать не менее двух животных на один антиген. Этот принцип снижает вероятность полного отказа в результате отсутствия реакции на антигены отдельных животных.
Препарат антигена
Размер, степень агрегации и относительная природная активность белковых антигенов могут существенно повлиять на качество и количество продуцируемых антител. Небольшие полипептиды ( Количество антигена
Выбор количества антигена для иммунизации зависит от свойств выбранного антигена и адъюванта. Как правило, количество белка в адъюванте от микрограмма до миллиграмма необходимо для выработки антител с высоким титром. Дозировка антигена обычно зависит от вида, а не от массы тела. Так называемое «окно» иммуногенности у каждого вида велико, но слишком много или слишком мало антигена может вызвать толерантность, подавление или иммунное отклонение в отношении клеточного иммунитета, а не удовлетворительный гуморальный ответ. Сообщалось об оптимальных и обычных уровнях белкового антигена для иммунизации определенных видов в следующих диапазонах:
Сообщается, что оптимальные «затравочные» дозы находятся на нижнем конце каждого диапазона.
Аффинность сывороточных антител увеличивается со временем (в месяцах) после инъекции смесей антиген-адъювант и по мере того, как антиген в системе уменьшается. Широко используемые дозы антигена для «бустерной» или вторичной иммунизации обычно составляют половину от начальной дозы. Антигены не должны содержать побочных продуктов и химикатов, таких как полиакриламидный гель, SDS, мочевина, эндотоксин, твердые частицы и экстремальные значения pH.
Пептидные антитела
При исследовании пептидов для синтеза и иммунизации рекомендуется избегать определенных остатков и последовательностей из-за потенциальных проблем с синтезом. Сюда входят некоторые из наиболее общих характеристик:
Реактивность
Исследователи также должны учитывать статус нативности белковых антигенов при их использовании в качестве иммуногенов и реакцию с продуцируемыми антителами. Антитела к нативным белкам лучше всего реагируют с нативными белками, а антитела к денатурированным белкам лучше всего реагируют с денатурированными белками. Если выявляемые антитела должны использоваться на мембранных блотах (белки, подвергнутые денатурирующим условиям), тогда антитела должны быть получены против денатурированных белков. С другой стороны, если антитела должны использоваться для реакции с нативным белком или блокирования активного сайта белка, тогда антитела должны быть созданы против нативного белка. Адъюванты часто могут изменять нативность белка. Обычно абсорбированные белковые антигены в предварительно полученном адъюванте эмульсии масло-в-воде сохраняют лучшую структуру природного белка, чем в эмульсиях вода-в-масле.
Асептичность
Антигены всегда следует готовить с использованием методов, гарантирующих отсутствие в них микробного загрязнения. Большинство препаратов белковых антигенов можно стерилизовать путем пропускания через фильтр 0,22 мкм. Септические абсцессы часто возникают в местах прививки животных при использовании зараженных препаратов. Это может привести к неудаче иммунизации против целевого антигена.
Адъюванты
Наиболее часто используемыми адъювантами для выработки антител являются адъюванты Фрейнда, квасцы, система адъювантов Ribi и Titermax.
Адъюванты Фрейнда
Адъювантная система Ribi
Адъюванты Ribi представляют собой эмульсии типа «масло в воде», в которых антигены смешиваются с небольшими объемами метаболизируемого масла (сквалена), которые затем эмульгируются физиологическим раствором, содержащим поверхностно-активное вещество Полисорбат 80. Эта система также содержит очищенные микобактериальные продукты (фактор пуповины, скелет клеточной стенки) в качестве иммуностимуляторов и бактериального монофосфориллипида А. Доступны три различных вида ориентированных составов адъювантной системы. Эти адъюванты взаимодействуют с мембранами иммунных клеток, что приводит к индукции цитокинов, которые усиливают захват, процессинг и презентацию антигена. Эта адъювантная система намного менее токсична и менее эффективна, чем FCA, но обычно индуцирует удовлетворительное количество антител с высокой авидностью против белковых антигенов.
Титермакс
Титермакс представляет собой адъюванты нового поколения, которые менее токсичны и не содержат материалов биологического происхождения. Он основан на смесях действующих поверхностно-активных веществ, линейных, блоков или цепочек неионных сополимеров полиоксипропилена (ПОП) и полиоксиэтилена (ПОЭ). Эти сополимеры менее токсичны, чем многие другие поверхностно-активные вещества, и обладают мощными адъювантными свойствами, которые способствуют хемотаксису, активации комплемента и продукции антител. Адъювант Titermax образует эмульсию воды в масле из микрочастиц с сополимером и метаболизируемым скваленовым маслом. Сополимер покрыт стабилизирующими эмульсию частицами диоксида кремния, что позволяет включать большие количества самых разнообразных антигенных материалов. Активный адъювант сополимер образует гидрофильные поверхности, которые активируют комплемент, иммунные клетки и повышенную экспрессию основных молекул гистосовместимости класса II на макрофагах. Titermax представляет антиген в высококонцентрированной форме для иммунной системы, что часто приводит к титрам антител, сравнимым с FCA или выше.
Фармацевтическое использование
Преимущества
Использование поликлональных антител (PAb) по сравнению с моноклональными антителами имеет свои преимущества. Технические навыки, необходимые для производства поликлональных антител, не столь высоки. Они недороги в изготовлении и могут быть произведены довольно быстро, на изготовление уходит до нескольких месяцев. PAb гетерогенны, что позволяет им связываться с широким спектром антигенных эпитопов. Поскольку PAb производятся из большого количества клонов B-клеток, они с большей вероятностью будут успешно связываться со специфическим антигеном. PAbs остаются стабильными в различных средах, таких как изменение pH или концентрации соли, что позволяет им более применимо в определенных процедурах. Кроме того, в зависимости от необходимого количества PAbs можно производить в больших количествах по отношению к размеру используемого животного.
Научная электронная библиотека
Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,
3.1.2. Антитела в ИХМ
В ИХМ используются специфические, или диагностические антитела для распознавания анализируемого антигена. Получают специфические антитела с помощью различных лабораторных животных (кролик, коза, овца, лама, курица, мышь). Для этого животное иммунизируют антигеном, к которому необходимо получить специфичные антитела, либо модифицированным антигеном, дающим наилучший иммунный ответ. Например, низкомолекулярные вещества обладают слабой иммуногенностью (способностью вызывать иммунный ответ), поэтому для иммунизации используют конъюгат аналога определяемого вещества с белком-носителем. Соединение (субстанция, конъюгат), используемый для иммунизации и вызывающий в организме животного иммунный ответ, называется иммуногеном. Часто для усиления иммунного ответа животным вместе и иммуногеном вводят адъювант – специальный реагент, активирующий иммунную систему.
Процесс получения специфических антител в ИХМ является длительным и многостадийным. Основные стадии этого процесса, на каждой из которых происходит подбор условий и оптимизация процесса:
1. Подбор структуры и синтез иммуногена (конъюгата).
2. Иммунизация животного:
● вид иммунизируемого животного;
● форма представления антигена (с адъювантом или без него);
● способ введения антигена реципиенту, доза и сроки.
3. Получение и характеризация сыворотки.
4. Очистка (выделение) антител, либо получение моноклональных Ат.
Одной из основных характеристик антител является их аффинность. По аффинностью понимают силу связывания активного центра молекулы антитела с соответствующей детерминантой антигена.
Другой важной характеристикой антител (антисыворотки) является специфичность. Под специфичностью антител понимают способность антител отличать иммуноген от любого другого антигена (замена).
Специфичность получаемых при иммунизации антител к гаптену прежде всего зависит от структуры конъюгированного антигена гаптен – носитель. Другими словами, используя иммуногены различной структуры, можно получать антитела как высокоспецифичные, т.е. узнающие только определяемое вещество (или вещество и самые близкие к нему по структуре соединения), так и антитела с широким спектром специфичности, способные реагировать с родственными соединениями, например, с метаболитами.
В ИХМ используются 2 типа антител – моноклональные и поликлональные. Поликлональные антитела – антитела, образующиеся в сыворотке крови в разных клонах B-лимфоцитов и связывающиеся с различными антигенными детерминантами (эпитопами) молекулы-мишени (антигена). Смесь антител, выделенную из сыворотки крови, называют поликлональным препаратом. Для получения поликлональных антител используются различные иммунизированные животные (чаще всего кролики).
Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики:
● содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой;
● поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различить две подобные мишени, например, когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой; либо когда нужно различить два вещества из одной группы.
Для реализации вышеприведенных целей были разработаны препараты антител, специфичные к одной определённой антигенной детерминанте, то есть препараты моноклональных антител. Моноклональные антитела – антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные Ат характеризуются одной константой аффинности и узкой специфичностью. Все молекулы моноклональных Ат и, соответственно, структуры их центров связывания, являются идентичными.
Моноклональные Ат успешно применяются для создания узкоспецифи ческих тест-систем, способных опреде-лять индивидуальное вещество или узкий круг близкородственных веществ.
Например, с использованием моноклональных Ат разработаны тест-системы для определения героина (не специфичные к морфину, кодеину), экстази (неспецифичные к близким по структуре амфетамину и метамфета-мину).
Получение моноклональных Ат является длительным высокотехнологичным процессом. В данном случае в качестве иммунизируемых животных используются мыши. У иммунизированных мышей, давших хороший иммунный ответ к введенному иммуногену, отбирают лимфоузлы, содержащие большое количество B-лимфоцитов. Их смешивают с линией миеломных (раковых) клеток, которые потеряли способность синтезировать свои собственные антитела, после чего происходит гибридизация – образование гибридных клеток, интенсивно синтезирующих нужное антитело. Затем клоны гибридных клеток тести-руют, отбирают один или несколько клонов, синтезирующих Ат с нужной специфичностью, и клонируют уже отобранный нужный клон. В результате можно наработать большое количество антител заданной специфичности.
В различных вариантах ИХМ могут использоваться как поликлональные, так и моноклональные антитела, в зависимости от поставленной задачи.
Рис. 8. Схема получения моноклональных антител
В гетерогенных форматах ИХМ используется еще один вид антител – антивидовые Ат. Антивидовые антитела (т.е. антитела против вида животных) – это антитела, полученные против антител животного другого вида. Например, есть антитела «овца против кролика», «кролик против мыши», «кролик против человека» и др. Это означает, что нормальными антителами животного, против которого хотят получить антивидовые Ат, иммунизируют животное другого вида. В результате получают иммунный ответ на любые Ат первого вида. Антивидовые Ат удобно использовать для получения универсального меченого реагента – например, конъюгата с ферментом. Такой конъюгат можно использовать для выявления иммунных комплексов с антителами любой специфичности, полученных у данного вида животного. Т.е., например, для ИФА наркотических веществ любого класса можно использовать один меченый ферментом реагент (см. раздел Иммуноферментный анализ).