Проба кумбса для чего проводят
Антиглобулиновый тест. Прямая и непрямая реакция Кумбса.
1. Что такое антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса?
Антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса проводится для того, чтобы выявить определенные антитела, которые атакуют красные кровяные клетки (эритроциты).
Антитела это белки, производимые иммунной системой. Как правило, антитела связываются с посторонними веществами, такими как бактерии и вирусы, и уничтожают их.
2. Зачем нужен тест на антитела?
Тест на антитела может проводиться в следующих случаях:
Перед переливанием крови
Вы наверняка знаете, что у человека может быть одна из четырех групп крови. И антиглобулиновый тест можно проводить для определения возможности переливания крови. Если вам делают переливание, кровь донора должна соответствовать вашему типу (иметь одинаковые антигены). Если при переливании антигены отличаются, иммунная система разрушит перелитые клетки. Это может привести к серьезным заболеваниям и даже смерти. Именно поэтому поиск нужного типа крови является столь важным фактором.
Для выявления риска резус-сенсибилизации
Женщине с отрицательным резус-фактором крови могут провести инъекцию анти-Rh- гаммаглобулина (например, RhoGAM), используемого для предотвращения развития Rh- гемолитической болезни.
Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии
Аутоиммунная гемолитическая анемия является редким заболеванием, связанным с образованием антител к собственным антигенам эритроцитов.
3. Типы антиглобулиновой пробы
Существуют два типа антиглобулиновой пробы, или реакции Кумбса: прямой и непрямой.
Прямая реакция Кумбса, или прямой антиглобулиновый тест обнаруживает антитела, связанные с эритроцитами. Он используется для определения анемии. При этой болезни эритроциты разрушаются быстрее, чем производятся.
Непрямая реакция Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест проводится для поиска антител, не связанных с эритроцитами. Для пробы используется сыворотка крови, в которой и находятся антитела. Эта процедура достаточно редкая: в основном ее проводят для определения возможности переливания крови или как этап обследования беременных женщин.
4. Результаты реакции Кумбса
Отклонение от нормы:
Проба Кумбса непрямая
Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела
Синонимы русские
Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела, Непрямая реакция Кумбса, Проба Кумбса косвенная, Непрямой антиглобулиновый тест, НАТ, Титр антирезусных антител, Реакция агглютинации для определения титра антирезусных антител
Синонимы английские
RBC Antibody Screen, Indirect Antiglobulin Test, IAT, Indirect Coombs Test, Indirect Anti-human Globulin Test, Antibody Screen, Anti Rh, Rh Typing.
Зачем нужно исследование?
Для выявления антител, направленных против антигенов эритроцитов
В каких случаях назначается?
Какой биоматериал используется для исследования?
Как подготовиться к исследованию?
Особой подготовки не требуется.
Что исследуется?
Титр антирезусных антител ищет циркулирующие антитела в крови, направленные против эритроцитов. Основная причина, по которой у человека могут циркулировать антитела к эритроцитам в крови, заключается в том, что он получил при переливании крови или во время беременности другие эритроциты, отличные от его (чужеродные эритроциты). Эти антитела могут нанести вред, если человеку попадут эритроциты, на которые могут нацеливаться антитела, или если у беременной женщины есть антитела, нацеленные на эритроциты ее развивающегося плода.
Эритроциты обычно имеют структуры на поверхности, называемые антигенами. У людей есть свой индивидуальный набор антигенов на их эритроцитах, определяемый наследованием от их родителей. Основными антигенами или поверхностными идентификаторами на эритроцитах человека являются антигены O, A и B, а кровь человека группируется в группу крови A, B, AB или O в зависимости от наличия или отсутствия этих антигенов.
Другим важным поверхностным антигеном является резус-фактор, также называемый D-антигеном. Если он присутствует в эритроцитах человека, его группа крови Rh + (положительная); если оно отсутствует, кровь имеет тип Rh- (отрицательный). Кроме того, существует много других типов антигенов эритроцитов, которые составляют менее известные группы крови, такие как Kell, Lewis, and Kidd группы крови.
Есть несколько причин, почему кто-то может производить антитела против антигенов эритроцитов:
После переливания крови: мы производим антитела, направленные против антигенов эритроцитов A и B, не подвергаясь воздействию антигенов. Перед переливанием крови группу АВО и резус-фактор человека сравнивают с донорской кровью, чтобы предотвратить возникновение серьезной реакции при переливания крови. То есть кровь донора должна быть совместима с кровью реципиента, чтобы антитела не реагировали и не разрушали клетки донорской крови.
Если кому-то переливают кровь, его организм может распознать другие антигены эритроцитов из других групп крови (например, Kell или Kidd), которые для донора не являются чужеродными. Реципиент (получатель) может производить антитела для атаки эти чужеродные антигены. Люди, у которых было несколько переливаний, вырабатывают антитела к эритроцитам, потому что они подвергаются воздействию чужеродных антигенов эритроцитов при каждом переливании.
В первый раз, когда человек подвергается воздействию чужеродного антигена антирезусных антител при переливании крови или беременности, он может начать вырабатывать антитела, но его клетки обычно не имеют времени во время первого воздействия, чтобы произвести достаточное количество антител для фактического уничтожения чужеродных эритроцитов. Когда происходит следующее переливание или беременность, иммунный ответ может быть достаточно сильным для того, чтобы достаточное количество антител было выработано, прикреплено и разделено (гемолизировано) на перелитые эритроциты или эритроциты ребенка. Антитела к антигенам АВО встречаются в природе, поэтому не требуют воздействия чужеродных эритроцитов.
Антитела к эритроциту, которые обнаруживаются с помощью скрининга, могут быть идентифицированы с помощью теста идентификации антител (Alloantibody Identification, Antibody ID, RBC, RBC Ab ID).
Кто назначает исследование?
Гематолог, трансфузиолог, терапевт, врач общей практики, ревматолог, педиатр.
Общие вопросы
Для чего используется исследование?
Скрининг антител к эритроцитам используется для скрининга крови человека на наличие антител, направленных против антигенов эритроцитов антирезусных антител, отличных от антигенов A и B. Это выполняется всякий раз, когда ожидается переливание крови, или при пренатальном тестировании беременных женщин.
Основная причина, по которой у человека могут циркулировать антитела к эритроцитам в крови, заключается в том, что он получил при переливании крови или во время беременности другие эритроциты, отличные от его (чужеродные эритроциты). Эти антитела могут нанести вред, если человеку попадут эритроциты, на которые могут нацеливаться антитела, или если у беременной женщины есть антитела, нацеленные на эритроциты ее развивающегося плода.
Если антитела обнаружены, то проводится идентификация антител, чтобы определить, какие антитела присутствуют. Выполняется скрининг антител к эритроцитам, если присутствуют клинически значимые антитела. В случае переливания крови необходимо принимать во внимание антитела к эритроцитам и подбирать донорскую кровь, которая не содержит антиген(ы), к которому человек выработал антитела.
Если у кого-то возникает реакция (немедленная или отсроченная) на переливание крови, врач назначит прямой антиглобулиновый тест (прямую пробу Кумбса), чтобы помочь выяснить причину реакции. (ПАГТ обнаруживает антитела, прикрепленные к эритроцитам). Если ПАГТ положительный будет проведено исследование антител к эритроцитам, чтобы определить, выработал ли пациент новые антитела.
Во время беременности непрямой антиглобулиновый тест используется для выявления антител в крови матери, которые могут проникать через плаценту и атаковать эритроциты ребенка, вызывая гемолитическую болезнь новорожденного. Наиболее серьезной причиной является антитела, вырабатываемые в ответ на антиген эритроцитов, называемый «антиген D» в системе группы крови резус (резус-фактор).
Человек считается резус-положительным, если D-антиген присутствует в эритроцитах, и резус-отрицательным, если отсутствует. Резус-отрицательная мать может выработать антитела, когда она подвергается воздействию клеток крови резус-положительного плода. Чтобы предотвратить это, у резус-отрицательной матери должен быть проведен непрямой антиглобулиновый тест в начале беременности, через 28 недель и перед родами. Если в течение 28 недель отсутствуют резус-антитела, женщине делают инъекцию резус-иммуноглобулина (RhIg), чтобы удалить резус-позитивные эритроциты плода, которые могут присутствовать в ее кровотоке, чтобы предотвратить выработку резус-антител матерью.
При рождении определяется резус-фактор ребенка. Если у ребенка резус-отрицательный результат, то матери не требуется повторная инъекция. Если у ребенка резус-положительный результат, а у матери отрицательный статус на антиген D, матери назначается дополнительный RhIG.
Этот тест также может быть использован для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии в сочетании с прямым антиглобулиновым тестом. Это состояние может быть вызвано тем, что человек производит антитела против своих собственных антигенов эритроцитов. Это может происходить при некоторых аутоиммунных заболеваниях (например волчанка); при таких заболеваниях, как лимфома или хронический лимфолейкоз; при таких инфекциях, как микоплазменная пневмония и мононуклеоз. Это может также произойти с некоторыми людьми при использовании определенных лекарств (например пенициллин).
Когда назначается исследование?
Непрямой антиглобулиновый тест проводят перед любым предполагаемым переливанием крови.
Непрямой антиглобулиновый тест назначают на ранних сроках беременности как часть обследования каждой женщины при беременности. У резус-отрицательных женщин это также делается через 28 недель и после родов, если у ребенка определен резус-положительный результат. У отрицательных беременных женщин с известными антителами исследование иногда назначается в качестве инструмента мониторинга, чтобы приблизительно отслеживать количество присутствующих антител.
Что означают результаты?
Дополнительная информация.
Циркулирующее антитело к эритроциту, когда оно присутствует, никогда не исчезнет, но может упасть до неопределяемого уровня. Если человек снова подвергается воздействию антигена, произойдет быстрая выработка и атака эритроцитов, поэтому антитело будет воспринято (обработано, как если бы оно присутствовало), даже если оно не обнаружено.
Каждое переливание крови подвергает человека комбинации антигенов на эритроцитах донора. Всякий раз, когда перелитые эритроциты содержат антигены, чужеродные эритроцитарному количеству реципиента (получателя), существует возможность для образования антител. Если у кого-то происходит много переливаний крови в течение определенного периода времени, он может производить антитела против многих различных антигенов. Это может затруднить поиск совместимой крови.
Что было до разработки RhIg (резус-иммуноглобулина)?
До разработки инъекции резус-отрицательные матери часто становились сенсибилизированными (повышение чувствительности организма) из-за крови своего первого резус-положительного ребенка и начинали вырабатывать анти-резус-антитела. Любые последующие резус-позитивные дети будут иметь некоторую степень резус-заболевания из-за того, что анти-резус-антитела матери атакуют эритроциты ребенка. Выкидыш и мертворожденные дети были распространены, и те дети, которые родились, часто нуждались в немедленном переливании крови, чтобы выжить. Иммуноглобулин инъекция в значительной степени предотвращает эти осложнения, хотя у небольшой количества женщин все еще развивается резус-антитела.
Проба Кумбса
Поликлиника Отрадное предлагает сдать анализ в наиболее удобном для вас месте: в условиях клиники или на дому.
Анализ на пробу Кумбса выполняется в течение 1 дня и в стандартном режиме будет готов через сутки после взятия крови. Все данные автоматически высылают на электронную почту пациента, указанную при регистрации в клинике.
Показания к проведению пробы
Из множества существующих антигенов в медицинской практике наибольшее значение уделяется трем типам агглютиногенов крови. Одним из них является тип ответственный за проявление резус-фактора: если он присутствует на мембране эритроцита, диагностируют Rh+ группу крови, если отсутствует – Rh-. Если в состав резус-отрицательной крови попадают эритроциты с агглютиногенами Rh+, организм запускает реакцию иммунного ответа и начинает вырабатывать антитела к этому антигену, что становится причиной патологических состояний.
Справка! Резус-фактор — сложная многокомпонентная система из нескольких десятков антигенов. Наиболее часто встречаемые из них — агглютиногены типа D (85% случаев), а также E и C.
Пробу Кумбса проводят только при наличии прямых показаний. Общий список причин для назначения пробы Кумбса:
Более конкретные показания зависит от типа проводимого исследования.
Прямая проба Кумбса
Прямой тест позволяет обнаружить антитела на поверхности эритроцитов. Это необходимо для диагностики уже имеющихся гемолитических патологий:
Гемолиз кровяных элементов наблюдается при онкологических, инфекционных, ревматических заболеваниях, поэтому прямая проба Кумбса может использоваться как дополнительное средство диагностики патологического состояния. При этом стоит помнить: отрицательное значение анализа не исключает вероятность гемолиза, а является поводом для дополнительного обследования.
Непрямая проба Кумбса
Непрямая проба чаще применяется для предотвращения патологических ситуаций. Она помогает выявить антитела в плазме крови, что необходимо для оценки совместимости при переливании и диагностики рисков резус-конфликта во время беременности.
Проба Кумбса при ведении беременности
Более 80% людей имеют положительный резус-фактор (Rh+), соответственно, чуть менее 20% являются резус-отрицательными. Если у Rh- матери развивается Rh+ ребенок, ее организм начинает вырабатывать антитела, атакующие эритроциты плода, провоцируя гемолиз.
С учетом того, что процент “разнорезусных” браков достигает 12-15%, риск гемолитической болезни новорожденных должен быть велик, но в реальности лишь в 1 из 25 подобных случаев у женщин наблюдается явление сенсибилизации (на 200 успешных родов 1 пример гемолитической патологии). Частично это обусловлено тем, что первый резус-положительный ребенок обычно не вызывает открытой агрессии организма матери; подавляющее количество случаев приходится на второго и последующих детей. Действует тот же принцип, что и при обычной сенсибилизации к тому или иному аллергену.
При первом контакте реакции не происходит. Организм только знакомится с новым для него антигеном, вырабатывая антитела класса IgМ, которые отвечают за быстрый иммунный ответ, но редко проникают через плацентарный барьер в кровь ребенка. Все патологические реакции проявляются при повторной “встрече”, когда в организме начинают вырабатываться антитела класса IgG, легко проникающие в кровоток плода, запуская процесс гемолиза.
Непрямая проба Кумбса при беременности позволяет обнаружить наличие антител в организме матери и вовремя выявить начальную стадию сенсибилизации. Положительный ответ, требует постановки на учет с ежемесячным исследованием титра антител и обязательной госпитализацией за 3-4 недели до родов.
Справка! Несовместимость по резус-фактору на состоянии матери никак не сказывается, гемолитическая болезнь развивается только у ребенка. В тяжелых случаях и при отсутствии своевременной реакции плод может погибнуть еще в утробе или сразу после рождения.
Подготовка к процедуре и ее проведение
Для диагностики используют венозную кровь. Специальная длительная подготовка к проведению пробы Кумбса не требуется. Старайтесь соблюдать стандартный набор правил перед взятием крови из вены на анализ:
Метод исследования основан на реакции гемагглютинации.
При проведении прямой пробы на образец крови воздействуют заранее заготовленной антиглобулиновой сывороткой с известными показателями, выдерживают смесь некоторое время и проверяют на предмет агглютинатов, которые образуются при наличии на эритроцитах антител. Уровень содержания агглютинатов диагностируют с помощью агглютинирующего титра.
Непрямая проба Кумбса имеет сходную методику, но более сложную последовательность действий. В отделенную сыворотку крови вводят антигенные эритроциты (с резус-фактором) и только после этих манипуляций добавляют антиглобулиновую сыворотку для диагностики и титра агглютинатов.
Результаты исследования
В норме и прямая, и непрямая проба Кумбса должны давать отрицательный результат:
Справка! Антиглобулиновый тест отличается высокой чувствительностью, но имеет малую информативность. Он не регистрирует активность гемолитического процесса, не определяет тип антитела и не в состоянии выявить причину патологии. Для получения более полной картины, лечащий врач обязательно назначает дополнительные исследования (микроскопию крови, общий и биохимический анализ, ревмопробы, СОЭ, уровень железа и ферритина).
Причиной положительной пробы могут стать:
Ни одна из вышеперечисленных проблем не может быть решена пациентом без врачебной помощи. Во всех случаях потребуется срочная консультация, постановка на учет или экстренная госпитализация.
Внимание! В редких случаях возможна ложноположительная проба Кумбса. Причиной этого могут стать частые переливания крови, а также ряд заболеваний: ревматоидные артриты, красная волчанка, саркоидозы. Также это явление может наблюдаться после удаления селезенки, а также при нарушении хода реакции (частые встряхивания содержимого, наличие загрязняющих примесей).
Проба кумбса для чего проводят
Принцип антиглобулинового теста Кумбса. Антиэритроцитные антитела неполного типа и молекулы комплемента (С), находящиеся на поверхности эритроцитов выявимы — прямой тест — их агглютинацией в контакте с животной сывороткой, содержащей антитела на человеческий антиглобулин (антиглобулиновая сыворотка). Свободные в сыворотке неполные антитела выявляются — косвенный тест — их закреплением на смеси нормальных эритроцитов группы 0, все антигены которых принадлежат известной резус-системе, далее агглютинируемые под воздействием антиглобулиновой сыворотки.
Материалы, реагенты антиглобулинового теста Кумбса: пробирки на 10/100 мл; градуированные пипетки на 1, 2 мл; пастеровские пипетки; штативы; предметные нешлифованные стекла; 8,5‰ раствор NaCl; эритроциты. Эритроциты больного, равно как и принадлежащие к группе 0 получим из свежеотобранной крови на противосвертывающем веществе (раствор ЭДТА).
Эритроциты группы 0 отобрать с таким расчетом, чтобы они исходили от лиц в норме и содержали все антигены резус-системы. Их можно сохранять до 7 дней в аутологической плазме, при температуре + 4°С. В случае отсутствия эритроцитов группы 0, известной антигенной мозаики, можно использовать смесь эритроцитов группы 0, резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.
Сыворотка больного должна быть свежеотобранной.
Техника антиглобулинового теста Кумбса:
а) Прямой тест Кумбса: эритроциты больного промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl.
На несколько предметных стекол нанести по крупной капле из разведений антиглобулиновой сыворотки, а рядом — по маленькой капле из осадка эритроцитов больного; перемешать капли углом стекла. Приготовленный материал оставить на столе 5 мин., затем исследовать на наличие агглютинатов. В случае положительного результата определить максимальный агглютинирующий титр.
б) Косвенный тест Кумбса: эритроциты группы 0, резусположительные и резус-отрицательные промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl и подвергнуть воздействию сыворотки больного из расчета 2 капли эритроцитов на 8—10 капель сыворотки, затем, в течение 60 мин., провести инкубацию при температуре 37°С. После этого снова трижды промыть эритроциты и воздействовать на них антиглобулиновой сывороткой, по указаниям для прямого теста Кумбса.
Когда речь идет о холодовых активных антителах сенсибилизацию эритроцитов группы 0 провести 60 мин. при температуре + 4°С.
Примечание: 1) Не проводить прямой тест Кумбса на эритроцитах, сохраненных один или несколько дней при температуре + 4°С или комнатной температуре, поскольку результаты могут оказаться ложноположительными за счет фиксации имеющихся в нормальной сыворотке непол ных, активных на холоде антител. 2) В случаях выраженной гиперпротеинемии промывать эритроциты 4—5 раз и проверить отсутствие сывороточных белков в последней промывной жидкости, с помощью сулфосалициловой кислоты.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Непрямая проба Кумбса
Описание
Непрямая проба Кумбса — непрямой антиглобулиновый тест. Он позволяет выявить атипичные антитела в плазме больных, в том числе аллоантитела, к чужим антигенам эритроцитов. Исследование выполняется когда прямая проба Кумбса оказалась отрицательной и антитела не были обнаружены.
Непрямой антиглобулиновый тест определяет анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с и анти-е антитела к антигенам эритроцитов в плазме.
Исследование протекает в 2 этапа, поэтому и имеет название «непрямая проба».
На пером этапе антитела в сыворотке больного, которые не связаны с эритроцитами, фиксируют на эритроцитах здорового человека. Вторым этапом отмытые эритроциты донора группы 0(I) инкубируют с исследуемой сывороткой. Если в сыворотке присутствуют антитела, то они связываются с эритроцитами. Далее эти эритроциты обрабатывают антиглобулиновой сывороткой, которая содержит антитела против антител, т.е. фактически проводят прямую реакцию Кумбса. При появлении агглютинации проба расценивается как положительная непрямая проба Кумбса.
Положительный результат непрямой пробы Кумбса свидетельствует о возможных трудностях при подборе крови для переливания и проведении перекрёстной пробы на совместимость с консервированной кровью.
Накануне сдачи исследования нужно избегать физических нагрузок и стрессовых состояний.
Препараты, которые могут повлиять на результат пробы:
хинидин, метилдофа, цефалоспорины, сульфаниламиды, хлорпромазин, дифенилгидантоин, этосуксимид, гидралазин, леводопа, мефенаминовая кислота, мелфалан, пенициллин, прокаинамид, рифампин, стрептомицин, тетрациклины, изониазид.
Интерпретация результатов
В норме непрямая проба Кумбса отрицательная, что свидетельствует об отсутствии на поверхности эритроцитов антител и комплемента.